Az apicomplexan paraziták listája. Élelmiszer-mikrobiológia


Itt kombináljuk a globális foszfo-proteomikai elemzést a kinome-szerű fordított genetikával, hogy értékeljük a fehérje-foszforiláció fontosságát a Plasmodium falciparum asexual proliferációjában. Számos parazitafehérje-kináz önmagában foszforilálódik feltételezett szabályozói maradékokon, beleértve a PfGSK3 és a PfCLK3 aktivációs hurok tirozinjait is; kimutattuk, hogy a PfCLK3 Y foszforilációja elengedhetetlen a teljes kináz aktivitáshoz.

A kinome-szerű fordított genetikai stratégia 36 parazita kinázt azonosított az eritrocitás schizogónia viszkető paraziták. Ezek a vizsgálatok nemcsak a fehérje-foszforiláció által szabályozott folyamatokat tárják fel, hanem meghatározzák a maláriaellenes gyógyszerek lehetséges célpontjait a parazita kinomán belül.

Bevezetés A malária évente még több mint 1 millió embert öl meg, és a morbiditás forrása, amely komoly akadályt jelent számos második és harmadik ország társadalmi és gazdasági fejlődésében 1.

Foraminifera parazita vagy sem

Meglepő módon, annak ellenére, hogy a fehérje-foszforiláció egy univerzális szabályozó mechanizmus, amelyet számos humán betegségben gyógyszeres célpontként mutatnak be, a maláriaparaziták nagyrészt eltérő fehérje-kinázjainak és foszfó-jelző kaszkádjainak megcélzásának lehetősége 2, 3.

Ennek az elhanyagolásnak az egyik tényezője az, hogy a foszforiláció az apicomplexan paraziták listája a Plasmodium falciparum legvirulensebb humán maláriaparazitájának biológiájában a foszforiláció szerepével kapcsolatban komolyan kevés.

Két független genomi elemzés azonosította a P. Ebben a tekintetben a malária és a humán kinomok hasonlóak, mivel nagy és változatos géncsaládok, csepp a parazitáktól, mérgező személyek számára természetesen a humán kinome esetében több szabályozási módot és változatos sejtalapokat képeznek.

Az általános hasonlóság ellenére azonban a sűrű kutikula a kerek féregben és az emlős fehérje kinázok közötti szekvenciahomológia sok esetben korlátozott, és ennek következtében számos Plasmodium protein kináz nem rendelkezik ortológokkal az emberi gazdaszervezetben. Ezek közé tartoznak a kalciumfüggő kinázok CDPK-kamelyek szorosan hasonlítanak a növényi kinázokra, ahol a kináz-domén egy 7- es kalodulin-szerű doménhez, valamint a P.

Továbbá, a P. Az emberi és maláriális kinomák közötti jelentős filogenetikai sokféleség alapját képezheti a malária-kinome 2 szelektív célzásának. Bár ez egy vonzó fogalom, nagyon kevés információ áll rendelkezésre a fehérje-foszforiláció szerepéről a Plasmodium biológiában, és ezért nehéz megjósolni a malária-kinázokra és foszforilációs útvonalakra ható gyógyszerek potenciális hatékonyságát és sejt-hatásait.

Ebben a fényben kombináltuk a kinome-kiterjedő gén knockout és fordított genetikát a globális foszfoproteomikával, hogy megvizsgáljuk a fehérje foszforiláció fontosságát P.

Vizsgálataink azt mutatják, hogy a P. Ez a meglepő redundanciahiány nemcsak az egyes fehérje-kinázok kulcsfontosságú szerepére, hanem a maláriaellenes az apicomplexan paraziták listája potenciálisan bőséges forrásaira is utal.

Az, hogy ezek a fehérje-kinázok a biológiai aktivitások sokféleségét szabályozzák, a foszfoproteóma természete nyilvánvalóvá válik, amelyre itt utalunk, hogy számos olyan kulcsfontosságú folyamatban szerepet játszó fehérjéket tartalmaz, mint a vörösvérsejtekbe történő invázió, metabolizmus, transzkripció és DNS-replikáció.

A maláriaparazitákban a fehérje-foszforiláció komplexitását hangsúlyozta továbbá, hogy a klasszikus tirozin-kináz-család hiánya ellenére a P. Eredmények Kinome-szerte fordított genetika P. Ezt homológ rekombinációval, egyetlen keresztezett gén-zavaró stratégiával S1-S3 kiegészítő ábrák sikerült elérni. A KO vektor integrációját 27 ePK gén hosszabb ideig tartó legalább 90 napos tenyésztése után nem figyeltük meg, ami azt jelzi, hogy az ezen gének által kódolt enzimek valószínűleg kulcsfontosságú szerepet játszanak a parazita aszeksuális proliferációban 1.

E 27 lókusz többségének 22 esetében külön-külön transzfektáltuk a 3D7 parazitákat jelölő vektorokkal, amelyek C-terminális tag hemagglutinin, Myc vagy zöld fluoreszcens fehérje elhelyezésére lettek kialakítva az ePK kódolási szekvenciával kiegészítő az apicomplexan paraziták listája S1.

PUBLIKÁCIÓS LISTA. Dr. Békési László Szabolcs

Ezt a komplementációs megközelítést most alkalmazhatjuk ezen enzimek részletes funkcionális vizsgálatára, például a komplementáló gén specifikus mutációinak hatását vizsgálva, nevezetesen a gatekeeper maradék mutációkat, amelyek túlérzékenyek a terjedelmes gátlókkal szemben lásd alább.

Teljes méretű asztal Összességében a címkézési és komplementációs megközelítések erőteljesen utalnak arra, hogy 22 ePK esetében a KO vektor integrációjának hiánya nem az apicomplexan paraziták listája rekombináció lokusz refraktivitása, hanem valószínűleg annak köszönhető, hogy ezek az ePK-k kulcsfontosságú szerepet játszanak az eritrocita asexual ciklusban, a malária patogenezisért felelős folyamat.

Ezért a jelen tanulmány 25 olyan ePK-k számát mutatja, amelyek nagy valószínűséggel kulcsfontosságú szerepet töltenek be a P. Ezzel szemben kimutattuk, hogy a KO vektor integrálódik a 32 ePK gén lokuszába.

Plasmodium – Wikipédia

Hat esetben jelezve az 1. Úgy véljük, hogy ezek a gének valószínűleg lényegesek; A tricladida plathelminthen populációk genotipizálása szükséges az ePK-gének e részhalmazának ezen értelmezésének validálásához. Ezen kinázok közül az egyik, a ciklikus AMP cAMP -függő kináz PfPKA, lényeges szerepet játszik továbbá az a megfigyelés, hogy a transzgénikus paraziták, amelyek mutáns cAMP-függő foszforilációs helyeket expresszálnak az apikális membrán antigén 1 fehérjében, jelentősen károsodnak.

Mindezek közül ben szilárdan meghatároztuk, hogy korlátozott hígítással megszakított lókuszú parazita klónokat kaptunk. Teljes méretű asztal Összefoglalva, az alapvető funkciók első értékelése azt mutatja, hogy a P.

Ezzel ellentétben a 12 határozottan elengedhetetlen, amint azt az életképes parazita klónok bizonyítják, amelyekben a releváns gének inaktiválódnak a 2.

  • A tabletták férgekre gyakorolt következményei
  • Valójában elképzelni sem lehet a legjobb nevét azoknak az amőbáknak, akik testük alakját.
  • Cica bolhákból és férgekből
  •  Я, кажется, догадалась, - сказала .
  • A férgek típusai és a helminták jellemzői
  • Coch bacillus parazita
  • Eperkezelés férgek számára

Ez a folyamat foszfoproteint azonosított, amelyek közül 26 humán fehérje és parazita volt 1. Összességében egyedi foszforilációs helyet azonosítottunk, amelyek túlnyomó többsége a parazita által kódolt fehérjéknél történt 1b. Az ezekben az elterjedt lemezekben bemutatott foszfo-peptideket a vizsgált hat biológiai replikáció közül legalább kettőben figyelték meg, és egyedi foszfo-peptid teljes adatsorából származtak, amelyeket szigorú kritériumok alapján szűrtek ki, beleértve a számítási elemzést és a kézi ellenőrzést.

Ezt a protokollt hat biológiai replikáción végeztük, hogy létrehozzuk az ebben az ábrában összefoglalt foszforilációs helyek listáját, és részletesen ismertettük az 1-es és 2-es kiegészítő adatokat ACN; acetonitril, IMAC; immobilizált fém affinitáskromatográfia, Ti02; titán-dioxid.

A gén ontológia leképezést és további megjegyzéseket az alapértelmezett Blast2GO paraméterekkel végeztük. Teljes méretű kép Az általános celluláris aktivitásokban szerepet játszó foszfoproteinek, például az anyagcsere, a DNS-replikáció és a gén-transzkripció 1b.

Babesia – Wikipédia

Ábra azonosításán túl sok foszfoproteint is társítottak parazita-specifikus folyamatokhoz, például cyto-adhézióhoz pl.

A vörösvérsejtekbe történő parazita invázió egy komplex folyamat, amely magában foglalja a merozoita kötődését, az újraszervezését, a merozoit bevonófehérjék eloszlását és az önmagában történő inváziót Ábra, 3. A RhopH komplex részeként felépített egyik Rhoptry fehérje, a 3. Ez az ellenanyag a foszfo-CLAG 3. Egy nemrégiben közzétett jelentés, amely a CLAG3. Frakciókból származó eredményeket az RQ oszlop elúciója mutatja.

A kontroll mintákat nem kezeltük foszfatázzal. A frakciót ezután az anti-foszfo-CLAG 3. A foszfo-CLAG 3. A mintákat 4, 6-diamidinofenil-indollal kék festettük a magok jelölésére. A skála sávja 2 μM.

A bemutatott kísérletek legalább három független kísérletet reprezentálnak.

5 Replies to “Foraminifera parazita vagy sem”

Teljes méretű kép Teljes méretű asztal Aktiválási hurok parazita protein kinázok treonin foszforilációja A globális foszfo-proteomikus vizsgálat kimutatta, hogy legalább 23 protein-kináz foszfoprotein 4. Ezeket a foszforilációs helyeket dr. Edwin Lasonder és Pietro Alano személyes kommunikáció által végzett foszfo-proteomiás vizsgálatban, valamint a PfPKA elleni anti-foszfó T antitestekkel és a PfPKG elleni anti-foszfó T antitestekkel végzett Western blot kísérletekkel igazoltuk kiegészítő ábra.

az apicomplexan paraziták listája gyermekek enterobiasis vizsgálata mi ez

A Pfcrket és Pfcrkt felfelé elhelyezkedő P. A parazita protein kinázok aktivációs hurok tirozin foszforilációja Annak ellenére, hogy a P. Ábra, b. Továbbá, anti-foszfotirozin antitestek alkalmazásával kimutattuk, hogy a fertőzött vörösvértestek RBC-k jelentősen megnövekednek a tirozin-foszforilációban a nem fertőzött kontrollok felett, és hogy a tirozin foszforiláció többsége kimutatható a parazita frakcióban 3c.

az apicomplexan paraziták listája

Úgy tűnik tehát, hogy a tirozin-foszforiláció a parazitafórikus vakuolban beleértve a parazitát is magában foglaljanem pedig kizárólag a gazdaszervezet eritrocitájában fordulhat elő. Mielőtt autoradiográfiát kaptunk jobb oldali panela gélt Coomassie kék-vel festettük bal oldali panel.

Ez egy olyan kísérlet autoradiográfiája, ahol a foszforilezett aminosav-standardok pozíciói jelennek meg. Az egyes szabványoknak megfelelő foltokat eltávolítottuk, és a radioaktív tartalmat folyadékszcintillációs számlálással határoztuk meg. Ezután kiszámítottuk az egyes foszfo-aminosavakhoz kapcsolódó relatív radioaktivitási mennyiségeket. A három független kísérlet reprezentatív eredménye. A kontrollok bakteriális lizátumok és nem fertőzött RBC lizátumok voltak.

A fehérjék terhelésének meghatározására a géleket Ponceau festéssel festettük. Teljes méretű kép A globális foszforilációs analízisből származó tirozin-foszforilált parazitafehérjék legtisztább példája a parazita protein kinázok tirozin-foszforilációja az aktivációs hurokban. Ábra keresztreagálnak, hogy meggyőződjenek arról, hogy a PfGSK3 valóban foszforilálódott Y en a vízszintes az apicomplexan paraziták listája 3g.

Látták: Átírás 1 Humán patogén protozoonok Protozoonok okozta fertőzések Szövetekben élősködők Acanthamoeba encephalitis, keratitis Balamuthia encephalitis, keratitis Naegleria encephalitis Entamoeba tályogok Balantidium tályogok Plasmodium malária Babesia babesiosis Toxoplasma encephalitis, retinitis Trypanosoma álomkór, Chagas-kór Leishmania leishmaniasis Encephalocytozoon microsporidiosis Pneumocystis pneumonia Humán patogén protozoonok Testüregekben élősködők Entamoeba dysenteria, tályogok Trichomonas vaginitis, urethritis, prostatitis Giardia felszívódási zavar Dientamoeba ritkán hasmenés Balantidium zoonózis, dysenteria Cryptosporidium zoonózis, hasmenés Cystoisospora immunszupprimáltak hasmenése Blastocystis hasmenés Enterocytozoon hasmenés Malária Négy faj humán patogén P. Fő rezervoárja a macska, de bármely más emlősben jelen lehet Étellel, vízzel, direkt kontaktussal terjed A fertőzés egészséges emberben tünetmentes A kórokozó áthatol a placentán, és magzati károsodást chorioretinitist, vízfejűséget okozhat Immunszupprimált betegben súlyos fertőzés következhet be encephalitis, chorioretinitis 1 2 Toxoplasma gondii II. Tachyzoita és cysta bradyzoita alakban fordul elő A diagnózis morfológiai vagy szerológiai Bélben élősködő Apicomplexa Cryptosporidium spp. Zoonózis, étellel, vízzel terjed Az oocysta nagyon ellenálló Állatok és az ember vékonybelében élősködnek, hasmenést okoznak Immunszupprimált betegben ez súlyos, életveszélyes lehet Diagnózisuk az oocysták kimutatásával történik, Kinyoun-festéssel Bélben élősködő Sporozoa Trichomonas vaginalis Obligát anaerob, nincs cysta alakja Elsősorban szexuális úton terjed Nőkben vaginitist, férfiakban urethritist, prostatitist okozhat A diagnózis morfológiai Kezelésére metronidazol javasolt Obligát anaerob Fekál-orál úton terjed, a duodenumban élősködik Hasmenést, az apicomplexan paraziták listája zavart okoz Diagnózisa morfológiai Kezelése metronidazollal történik Giardia lamblia G. Afrikai trypanosomiázis.

Továbbá kimutattuk, hogy a rekombináns fehérjeként expresszált PfGSK3 a baktériumokban is Y nél foszforilálódott 3f. További tirozin-foszforilációt detektáltunk a P. Ábra aktivációs hurokjában, amely szintén valószínűleg esszenciális kináz 1. A filogenetikai elemzések azt mutatják, hogy ezek a két kináz egy olyan klaszterhez tartoznak, amely a DYRK 4, 29 alcsaládot is tartalmazza.

A globális foszforilációs vizsgálat megállapította, hogy a PfCLK3 ebben a motívumában az tirozin in vivo foszforilálódott 4a. Ábra, begy pY elleni antofoszfopeptid antitest alkalmazásával igazolt megfigyelés 4c.

Ezeket a baktériumokat lizáltuk, és a kivonatot 20 μg a PfCLK3 középső panel vagy a tirozin elleni antitestek ellen PfCLK3 jobb oldali panel elleni antitestekkel vizsgált nyugati blotokban használtuk. A minták coomassie-foltja a bal oldali betöltési kontrollként jelenik meg. A foszforilált szubsztrátok reprezentatív autoradiográfiája látható, ugyanazon gél coomassie-foltjával, mint a töltésszabályozás.

az apicomplexan paraziták listája féreg jogorvoslati vélemények

Teljes méretű kép Ezt a PfCLK3-on történő foszforilációt valószínűleg az auto-foszforiláció okozta, hogy a bakteriálisan expresszált PfCLK3-t foszforiláltuk az tirozinon 4c. Mit esznek a kerekférgek továbbá, hogy a bakteriálisan expresszált PfCLK3 képes in vitro foszforilálni a mielin bázikus fehérjét 4f. Ezek az eredmények összhangban vannak azzal az elképzeléssel, hogy ez a protein kináz DYRK.

Ezért adataink arra utalnak, hogy a PfCLK3 az os tirozin enzimaktivitás szempontjából fontos, de az expressziós szintek szabályozása, a szubcelluláris lokalizáció vagy az aktiválási hurokon kívüli további foszforiláció révén további szabályozás is működik a PfCLK3 kináz finomhangolására. Ezeket a tirozin-foszforilált fehérjéket azonban csak egy biológiai replikációban figyelték meg, és így nem szerepelnek a 2.

Az a tény, hogy csak egyszer láttuk ezeket a tirozin-foszfor-peptideket, a foszfo-aminosav-analízisből kitűnik, hogy a tirozin-foszforilált fehérjék rendkívül alacsony száma 3b. Jelenleg vizsgáljuk ezt a lehetőséget. Vita Az itt bemutatott fordított genetikai vizsgálat megkísérli meghatározni, hogy mely parazita ePK-k szükségesek az eritrocitákban az asexual ciklus befejezéséhez.

Érdekes, hogy az 1. Például szinte az összes CMGC-csoport kináz és minden aurora-kapcsolódó kináz alapvetőnek tűnik az asszexuális ciklusban, míg a 4 NimA-hoz kapcsolódó kináz közül 3 nem szükséges, az életciklus különböző szakaszaiban a specifikus funkciókra vonatkozó különböző követelményeket az apicomplexan paraziták listája. A nem-lényegesség formális bemutatása a klonális vonalak genotípust igényli, amely jelenleg a 2.

Bár nagyon valószínű, hogy a fennmaradó 14 kináz amelyek a 2. Bár az inaktivált ePK génnel rendelkező paraziták többsége nem mutatott nyilvánvaló növekedési hibákat, két esetet figyeltünk meg PfPK7 PFBw 32 és Pfcrk-5 PFFwahol az ePK megszakítók lassú parazitaemiás növekedési görbét mutattak tipikus növekedési görbék jelennek meg az S6 és S7 Kiegészítő ábrákon ezen két gén genotipizálási adatai mellett ; a PfPK7 KO fenotípus részletes tanulmányozása Lehetnek további kinázok, amelyek deléciója növekedési fenotípust eredményez; ebben a tekintetben az átfogó értékelésnek meg kell várnia a klónok elérhetőségét minden olyan esetben, amikor a gén az apicomplexan paraziták listája megtörtént.

A PfeIK1 aszeksuális parazitákban expresszálódik, és kimutatták, hogy szükséges a PfeIF2a éhezésfüggő foszforilációjához az eritrocitás ciklus alatt 33, míg a PfeIK2 elsősorban a szexuális fejlődés során fejeződik ki, és szükséges a májfázis-specifikus gének korai fordulásának megelőzéséhez nyálmirigy sporozoitákban. Érdekes, hogy a PfPK4 P.

Terjedésük vízzel ivóvíz, uszodai víz, természetes vizek gyakoribb, mint élelmiszerekkel, az utóbbi módon többnyire a megtámadott háziállatok húsa fertőz. Gyakori fő gazdaszervezetek a macska, kutya, sertés és más háziállatok, és az ember csak köztesgazda, viszont több esetben az ember a parazita elsődleges élőhelye. Bár főleg csak a gyomor-bél betegségeket okozó protozoonokat tárgyaljuk, említést érdemel, hogy az emberiség egyik legnagyobb ellensége, a százmilliókat megbetegítő Plasmodium malariae szintén protozoon. Az amőbás dizentéria régóta ismert betegség, amelyet az Entamoebahistolytica okoz. A baktériumos vérhasnál enyhébb lefolyású, de sok esetben tünetmentes vagy hosszantartó, krónikus betegség.

Ha a funkciója valójában megakadályozza a PfeIF2α foszforilációjával történő általános transzlációt amint azt az eIF2α-peptid in vitro 35 foszforilációjának képessége is sugalljaaz következik, hogy a transzlációs faktor foszforilációjával történő transzlációs gátlás az erythrocyticus bizonyos szakaszában alapvető jellemzője.

Egy tesztelhető hipotézis az, hogy ez a merozoita ontogeniában és érett merozoitákban, a ciklus egyetlen szakaszában történik, ahol a fordítás lényegében inaktív.

  • Что он не мог разобрать, но все-таки кое-как прочитал первые буквы, В них не было никакого смысла.
  • Foraminifera parazita vagy sem
  •  Хорошо, - сказала .
  • Он не знал ни где он находится, ни кто его преследует и мчался, подгоняемый инстинктом самосохранения.
  • Pasozyt giardia u psa

Figyelemre méltó az a tény, hogy az eddig vizsgált, megszakított kináz génnel rendelkező elérhető parazita klónok egyike sem mutat nyilvánvaló fenotípust a gametocytogenesis sebességében; mindaddig, amíg az összes populációt klónoztuk és fenotípusosítottuk egy megszakított génnel, természetesen nem zárhatjuk ki kerekféreg regenerációja a lehetőségét, hogy ezen enzimek egyike szükséges a gametocytogenesishez.

Bizonyos ePK-k, amelyek nem nélkülözhetetlenek az asszexuális növekedéshez, már bizonyítottan szükségesek a 32, 36 szúnyogháló sikeres fertőzéséhez; ennek fényében jelenleg a szúnyogok összes nem esszenciális ePK-jának KO-klónjainak fenotípusát célozzuk meg.

Adataink azt mutatják, hogy összesen 36 ePK 1. Összehasonlításképpen, a rágcsáló malária parazita 66 pPP-jének egy újabb tanulmánya 43 olyan protein-kinázt azonosított, amelyek refraktívak a vérplazma deléciójára, és as génjei törölhetők 37 S1 kiegészítő táblázat.

Bár az egérparazitában elengedhetetlenül azonosított ePK-k és a P.

Hangsúlyozzuk itt, hogy a formális bizonyíték arra, hogy egy adott ePK gén nem nélkülözhetetlen az asszexi skizogóniához, megköveteli a populációkból származó klónok elemzését, amelyek bizonyítékot mutatnak a gén megszakítására vagy törlésére; ezt az az apicomplexan paraziták listája P. Összességében az itt bemutatott foszfoproteomikus analízis azt mutatja, hogy a fehérjefoszforiláció széles körben alkalmazható a sejtes folyamatok szabályozásában az apicomplexan paraziták listája P.

Ez nemcsak az általános házfelügyeleti funkciókat foglalja magában, mint például az anyagcsere, a DNS-replikáció és a transzkripció, hanem a parazita-specifikus folyamatok, például a vörösvérsejt-invázió és a cyto-tapadás. Továbbá, a tirozin-foszforiláció azonosítása az esszenciális protein-kinázok aktivációs hurokjában bizonyítja, hogy a tirozin-foszforiláció fontos a vérplazma parazita életképességében. A fehérje-foszforiláció fontosságát az emberi maláriaparazita életképességében az apicomplexan paraziták listája erősíti az a tény, hogy a paraziták ePK-k fele valószínűleg a vérplazma paraziták számára alapvető fontosságú.

Plasmodium

Tehát a kiterjedt foszfoproteóma, valamint az ePK-k sokaságának redundanciájának hiánya alátámasztja azt az elképzelést, hogy a parazitafehérje foszforilációjának a vérfázisban történő megcélozása hatékony stratégiát jelenthet a P.

Az emberi betegségben a célzott fehérje-kinázok egyik fő hátránya az, hogy a szelektív inhibitorok nehezen generálhatók, mivel sok gátló a 38 konzervált ATP-kötőhelyet célozza meg. Lehetséges azonban az ATP-kompetitív inhibitorok szelektivitásának megteremtése az inhibitor molekulák kölcsönhatásának kiterjesztésével a nem konzervált alloszterikus helyekre, amelyek az ATP-kötőhely melletti hidrofób zsebben helyezkednek el, 38, Ezt a stratégiát sikeresen alkalmazták számos, a rák 40 kezelésére szolgáló humán kinázok kezelésére tervezett protein kináz inhibitorokra, beleértve a klinikailag jóváhagyott Bcr — Abl inhibitor Imatinib Gleevec et is.

A kábítószer-tervezés hasonló megközelítése hatékony lehet a malária elleni szelektivitással rendelkező molekulák keresése során, és ezt a humán és plazmális kinomák közötti jelentős filogenetikai sokféleség 4 támogatja.

Egy ilyen stratégia a farmakológiai vegyületekre támaszkodik, és hozzáférést biztosít az alloszterikus helyekhez. Ezt elsősorban az V régió β5 szálán lévő gatekeeper-maradék határozza meg, amely távol van az aktív helytől és a csuklórégió szomszédságában. Ha az átjáró maradék nagyméretű például fenilalaninakkor az alloszterikus helyekhez való hozzáférés blokkolódik, míg egy kis például treonin vagy akár egy közepes méretű metionin gatekeeper maradék lehetővé teszi a hozzáférést Fontos megemlíteni, hogy a as fehérjék kinázából, amely valószínűleg elengedhetetlen a 4-es vérplazmához, egy kis gatekeeper-maradék treonin és es közepes méretű átjáró metionin.

Az alloszterikus helyek hozzáférhetőségének kihasználása ezekben az enzimekben egy stratégia trichocephalosis szarvasmarha parazitaölő aktivitással rendelkező szelektív parazita protein kináz inhibitorok kifejlesztésére. Lehetséges, hogy ezeknek az új kináz inhibitoroknak az egyik forrása megtalálható a legutóbbi szűrőprogramokban, amelyek több ezer maláriaellenes aktivitással rendelkező kémiai entitást azonosítottak, amelyek közül soknak az apicomplexan paraziták listája vannak összhangban a protein-kináz inhibitorokkal E képernyők eredményeinek bányászása a lényeges parazitafehérje-kinázokat és foszforilációs útvonalakat célzó gyógyszer-szerű vegyületek azonosítására potenciális utat biztosíthat a maláriaellenes szerek következő generációjának.

Mód Hozzáférés a foszfo-proteomikus adatokhoz Az ebben a vizsgálatban megfigyelt összes manuálisan validált foszfo-peptidet az 1. A klónozó primerek a 3-as kiegészítő adatokban találhatók. A komplementációs plazmidok kialakítása A kiválasztott ePK-k in vivo epizomális expressziójára szolgáló plazmidokat lásd az 1. Gateway LR klonáz reakcióval a gyártó utasításai szerint Invitrogen.

Békési László Szabolcs 1. Molnár, K. Tihany, Békési, L. Szakmérnöki disszertáció, Agrártudományi Egyetem, Gödöllõ.

A parazitákat, amelyek mind a kiütéses plazmiddal, mind a komplementációs plazmiddal transzfektáltuk, kettős hatóanyag-szelekció tenyésztési módszerek alkalmazásával tenyésztettük. Foszfo-aminosav-analízis A mágneses cellákkal tisztított iRBC-t 50 μl pellet térfogat μl Krebs pufferben foszfátmentes reszuszpendáltuk, és 20—25 μl friss 32P-ortofoszfáttal inkubáltuk 30 percig 37 ° C-on.

A lizátumot 2-D tisztító készlet Amersham Biosciences alkalmazásával állítottuk elő és tisztítottuk a gyártó utasításainak megfelelően. A végső szemcséket rövid ideig levegőn szárítottuk, és 20 μl 6 M HCl-ben szuszpendáltuk, és azonnal előmelegítettük ° C-os kemencébe hidrolízis céljából.

A felülúszó frakciókat 30 ° C-on szárítottuk speedvac centrifugán. A pelleteket 40 μl Hban feloldottuk, és ismét speedvac-on szárítottuk. Az utolsó eljárást még kétszer megismételjük. Az egyes minták 10 μl térfogatát 1 μl jelöletlen foszfor-aminosav-standardok, amelyek 1, 5 mg mindegyik foszfo-szerint, foszfo-treonint és foszfo-tirozint tartalmaznak 1 ml teljes térfogatban.

A standardok és a jelölt aminosavak keverékét 0, 5 ml-es alikvotokban egy 20 × 20 cm-es üvegtámogatott cellulóz vékonyréteg-kromatográfiás lemez Merck eredetére helyeztük, és két mintát vettünk az RBC citoszolból és a P.

A lemezt 1 órán át levegőn szárítottuk, mielőtt a második futtatást alkalmaztuk. A második futtatásnál a lemezt 90 ° -kal elforgattuk az óramutató járásával ellentétes irányban, és a második dimenziójú elektroforézist V-on 20 percig futtattuk.

A futtatás végén a lemezt egészségügyi parazitákból származó gyógynövény órán át levegőn szárítjuk. Az autoradiográfokat szokásos módon végeztük egy éjszakán át ° C-on.

A foszfo-aminosav-standardoknak megfelelő radioaktív az apicomplexan paraziták listája eltávolítottuk a lemezről, és szcintillációs számlálóval számoltuk.

Jégen 10 az apicomplexan paraziták listája inkubáltuk, a mintákat 3 percig centrifugáltuk g-nál pad centrifugábanés a felülúszókat átlagosan μl az apicomplexan paraziták listája pelletre összegyűjtjük a további frakcionáláshoz.

Az oszlopot 1 M nátrium-klorid-oldattal 1 ml térfogatban eluáljuk, ha a mintát triptikus emésztésben alkalmazzuk.